Иммуногистохимическое исследование увеальной меланомы и ее клеточного микроокружения

Введение. Патогенез увеальной меланомы определяется целым рядом факторов, включая молекулярно-генетические, иммунологические и др. Одним из подходов к изучению особенностей патогенеза опухолей данного типа является определение локального содержания в них отдельных субпопуляций лимфоцитов и макрофагов в сочетании с анализом пролиферативной активности опухолевых клеток.

Цель исследования – изучить иммуногистохимические особенности увеальной меланомы и ее клеточного микроокружения.

Материалы и методы. Проанализированы 24 энуклеированных глаза с увеальной меланомой (144 гистологических и 216 иммуногистохимических препаратов) без предшествующего лечения. Изучены клетки иммунного микроокружения: субпопуляции лимфоцитов и экспрессируемые макрофагами антигены CD68+ и CD163+ в строме меланомы и в 2–3 мм от нее. Определен индекс пролиферации опухолевых клеток Ki-67.

Результаты. Во всех образцах ткани увеальной меланомы выявлено наличие лимфоцитов в микроокружении опухолевых клеток. Большую часть исследуемых популяций лимфоцитов составили Т-цитотоксические CD28+-лимфоциты (абсолютное количество положительно окрашенных клеток – 607,3 ± 431,2; относительное – 18,84 ± 12,12 %) (p = 0,018), меньшую часть (практически в равном соотношении) – Т-хелперы CD4+, T-цитотоксические CD8+ и CD25+ лимфоциты (p = 0,6). Абсолютное количество натуральных киллеров субпопуляции CD16+ оказалось ниже по сравнению с субпопуляцией CD56+ (р = 0,05). Однако отмечено практически равное относительное количество изучаемых субпопуляций (р = 0,9). Гистологическое исследование выявило наличие в микроокружении ткани увеальной меланомы макрофагов. При иммуногистохимическом исследовании экспрессируемых противовоспалительными и проопухолевыми макрофагами антигенов CD68+ и CD163+ отмечено, что их абсолютное и относительное количество в ткани данной опухоли практически одинаковое, с небольшим преобладанием CD163+ (p = 0,7). Иммуногистохимический анализ показал, что в ядрах клеток меланомы в среднем содержится 575,2 ± 388,5 значимых клеток белка пролиферации Ki-67. Этот белок обнаружен в 16,69 ± 10,88 % опухолевых клеток.

Заключение. Иммуногистохимическое исследование позволяет выявить субпопуляции инфильтрирующих опухоль лимфоцитов, определить подтипы макрофагов и оценить индекс Ki-67 пролиферации опухолевых клеток. Полученные данные в дальнейшем дают возможность оценить значимость обнаружения отдельных субпопуляций иммунных клеток (в частности, Т-цитотоксических CD28+-лимфоцитов) в патогенезе увеальной меланомы в целях разработки таргетного воздействия, обоснования новых иммунотерапевтических подходов к лечению первичной опухоли и перепрограммирования измененных иммунных клеток.

1. Бровкина А.Ф., Панова И.Е., Саакян С.В. Офтальмоонкология: новое за последние два десятилетия. Вестник офтальмологии 2014;130(6):13–9.

2. Саакян С.В., Балацкая Н.В., Катаргина Л.А. и др. Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови при увеальной меланоме. Медицинская иммунология 2019;21(4):765–72.

3. Саакян С.В., Амирян А.Г., Цыганков А.Ю. и др. Клинические, патоморфологические и молекулярно-генетические особенности увеальной меланомы с высоким риском метастазирования. Российский офтальмологический журнал 2015;8(2):47–52.

4. Fidler I.J., Kim S.J., Langley R.R. The role of the organ microenvironment in the biology and therapy of cancer metastasis. J. Cell Biochem 2007;101(4): 927–36. DOI: 10.1002/jcb.21148.

5. Саакян С.В., Захарова Г.П., Мякошина Е.Б. Тучные клетки в микроокружении увеальной меланомы. Архив патологии 2019;81(6):63–70.

6. Johansson J., Siarov J., Kiffin R. et al. Presence of tumor-infiltrating CD8+ T cells and macrophages correlates to longer overall survival in patients undergoing isolated hepatic perfusion for uveal melanoma liver metastasis. Oncoimmunology 2020;10;9(1):1854519. DOI: 10.1080/2162402X.2020.1854519.

7. Lee N., Zakka L.R., Mihm M.C. Jr. et al. Tumour-infiltrating lymphocytes in melanoma prognosis and cancerimmunotherapy. Pathology 2016;48(2):177–87. DOI: 10.1016/j.pathol.2015.12.006.

8. Bronkhorst I.H., Ly L.V., Jordanova E.S. et al. Detection of M2-macrophages in uveal melanoma and relation with survival. Invest Ophthalmol Vis Sci 2011;3;52(2):643–50. DOI: 10.1167/iovs.10-5979.

9. Toivonen P., Mäkitie T., Kujala E. et al. Microcirculation and tumor-infiltrating macrophages in choroidal and ciliary body melanoma and corresponding metastases. Invest Ophthalmol Vis Sci 2004;45(1):1–6. DOI: 10.1167/iovs.03-0622.

10. Mooy C.M., de Jong P.T., Van der Kwast T.H. et al. Ki-67 immunostaining in uveal melanoma. The effect of preenucleation radiotherapy. Ophthalmology 1990;97(10):1275–80. DOI: 10.1016/s0161-6420(90)32420-x.

11. Al-Jamal R.T., Kivelä T. KI-67 immunopositivity in choroidal and ciliary body melanoma with respect to nucleolar diameter and other prognostic factors. Curr Eye Res 2006;31(1):57–67. DOI: 10.1080/02713680500478535.

12. Tian T., Olson S., Whitacre J. et al. The origins of cancer robustness and evolvability. Integr Biol 2011;3(1):17–30. DOI: 10.1039/c0ib00046a.

13. Lane A.M., Kim I.K., Gragoudas E.S. Survival rates in patients after treatment for metastasis from uveal melanoma. JAMA Ophthalmol 2018;136(9):981–6. DOI: 10.1001/jamaophthalmol.2018.2466.

14. Rantala E.S., Hernberg M., Kivela T.T. Overall survival after treatment for metastatic uveal melanoma: a systematic review and meta-analysis. Melanoma Res 2019;29(6):561–8. DOI: 10.1097/CMR.0000000000000575.

15. Heppt M.V., Heinzerling L., Kähler K.C. et al. Prognostic factors and outcomes in metastatic uveal melanoma treated with programmed cell death-1 or combined PD-1/cytotoxic T-lymphocyte antigen-4 inhibition. Eur J Cancer 2017;82:56–65. DOI: 10.1016/j.ejca.2017.05.038.

16. Roma-Rodrigues C., Mendes R., Baptista P. V. et al. Targeting Tumor Microenvironment for Cancer Therapy. Int J Mol Sci 2019;20(4):840. DOI: 10.3390/ijms20040840.

17. Bronkhorst I.H.G., Jager M.J. Uveal melanoma: the Inflammatory microenvironment. J Innate Immun 2012;4:454–62. DOI: 10.1159/000334576.

18. Саакян С.В., Захарова Г.П., Мякошина Е.Б. Клеточное микроокружение увеальной меланомы: клинико- морфологические корреляции и предикторы неблагоприятного прогноза. Молекулярная медицина 2020;18 (3):27–33.

19. Франк Г.А., Кузнецова О.А., Завалишина Л.Э. и др. Исследование PD-L1-статуса рака молочной железы с использованием моноклонального антитела SP142 и перспективы для определения лечебной тактики. Архив патологии 2019;81(5):5–10.

20. Oble D.A., Loewe R., Yu P. et al. Focus on TILs: prognostic significance of tumor infiltrating lymphocytes in human melanoma. Cancer Immun 2009;9(1):3.

21. McLean I.W., Saraiva V.S., Burnier M.N. Pathological and prognostic features of uveal melanomas. Can J Ophthalmol 2004;39:343–50. DOI: 10.1016/s0008-4182(04)80004-8.

22. Qin Y., Bollin К., Petaccia de Macedo M. et al. Immune profiling of uveal melanoma identifies a potential signature associated with response to immunotherapy. J Immunother Cancer 2020;8(2):e000960. DOI: 10.1136/jitc-2020-000960.

23. Krishna Y., McCarthy C., Kalirai Н. et al. Inflammatory cell infiltrates in advanced metastatic uveal melanoma. Human Pathology 2017;66:159–66. DOI: org/10.1016/j.humpath.2017.06.005.

24. Ly L.V., Bronkhorst I.H.G., van Beelen E. et al. Inflammatory cytokines in eyes with uveal melanoma and relation with macrophage infiltration. Invest Ophthalmol Vis Sci 2010;51(11):5445–51. DOI: 10.1167/iovs.10-5526.

25. Coussens L.M., Werb Z. Inflammation and cancer. Nature 2002;420(6917):860–7. DOI:10.1038/nature01322.

26. Tobal K., Deuble K., Mccartney A. et al. Characterization of cellular infiltration in choroidal melanoma. Melanoma Res 1993;3(1):63–5. DOI: 10.1097/00008390-199304000-00009.

27. Mantovani A. Tumor-associated macrophages in neoplastic progression: a paradigm for the in vivo function of chemokines. Lab Invest 1994;71(1):5–16.

28. Sun X., Kaufman P.D. Ki-67: more than a proliferation marker. Chromosoma 2018;127(2):175–86. DOI:10.1007/s00412-018-0659-8.

29. Новикова И.А., Максимова Н.А., Позднякова В.В. и др. Некоторые иммуногистохимические особенности меланоцитарных образований кожи. Современные проблемы науки и образования 2016;5:1–8.