Подкожный ксенографт меланомы человека MelCher5k/BRAF⁺ с экспрессией CD20

Введение. Метастатическая меланома кожи (мМк) характеризуется крайне неблагоприятным прогнозом. Значимая ремиссия мМк связана с применением вемурафениба, блокирующего пролиферацию клеток с мутацией в гене BRAF. Однако после отмены этого препарата быстро развивается рецидив, вызывающий необходимость продолжения лечения. поиски другой терапевтической мишени в первичной мМк привели к малочисленной субпопуляции стволовоподобных клеток, экспрессирующих антиген CD20. пилотные клинические испытания ритуксибама, блокирующего CD20, не дали ожидаемых результатов. Мы расценили это как отсутствие контроля над экспрессией СD20 в рецидивных клетках, что доступно только in vivo в адекватной модели рецидивирующей мМк / BRAF⁺ человека с высокой экспрессией СD20.

Цель исследования – создание модели in vivo рецидивирующей мМк / BRAF⁺ человека и оценка представленности субпопуляции клеток с экспрессией CD20.

Материалы и методы. В исследовании использованы вемурафениб (Roche, Швейцария), культура клеток меланомы человека MelCher5k / BRAF⁺ и иммунодефицитные мыши-самцы Balb / c nude массой тела 20–23 г, разведенные и содержащиеся в Национальном медицинском исследовательском центре онкологии им. Н. Н. Блохина. Животных с трансплантированной опухолью (n = 12) распределяли по 2 группам: с применением вемурафениба (экспериментальная группа) и без него (группа контроля). Сравнительную оценку динамики роста опухолевых узлов в группах проводили по соотношению объемов с помощью стандартного критерия Т / С (treatment / control), выраженному в процентах. Динамику экспрессии маркеров S100, CD20 и CD45 определяли методом проточной цитофлуориметрии до начала введения вемурафениба и в конце наблюдения.

Результаты. У мышей с MelCher5k / BRAF⁺, получавших вемурафениб с 7-х по 21-е сутки, с 10-х суток наблюдалась редукция опухоли с полной ремиссией к 20-м суткам. Рецидивы с развитием опухолевого узла в месте имплантации (возобновленный рост клеток меланомы) возникали на 28-е сутки (через неделю после отмены препарата), а затем в течение 34–41-х суток опухоль быстро прогрессировала. У мышей, получавших вемурафениб, доля CD20⁺-клеток в новом очаге составила 35 %, что в 1,82 раза превысило долю CD20⁺-клеток в опухоли мышей, не получавших этот препарат (19 %). при этом клетки вновь возникшей опухоли экспрессировали маркер меланомы S100 и не экспрессировали СD45.

Заключение. In vivo на модели MelCher5k / BRAF⁺ показано, что в рецидивном опухолевом узле, развивающемся после применения вемурафениба, значительно увеличивается доля стволовоподобных клеток, экспрессирующих CD20. Эти данные свидетельствуют о целесообразности использования разработанной модели для оценки клинической перспективности направленных на СD20 агентов, способных продлить ремиссию после отмены вемурафениба при рецидивирующей меланоме.