Advances in Molecular OncologyAdvances in Molecular OncologyУспехи молекулярной онкологии2313-805X2413-3787Publishing House ABV Press21810.17650/2313-805X-2019-6-2-48-54RESEARCH ARTICLESЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ СТАТЬИComparison of molecular genetic methods of detection of mutations in the CALR gene in myeloproliferative disordersСравнение молекулярно-генетических методов выявления мутаций в гене CALR при миелопролиферативных заболеванияхhttps://orcid.org/0000-0001-8277-8649KesaevaL. A.КесаеваЛ. А.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

kelar-22@mail.ruBulanovA. Yu.БулановА. Ю.
Russian Federation

3 Pekhotnaya St., Moscow 123182

123182 Москва, Пехотная ул., 3

FinashutinaYu. P.ФинашутинаЮ. П.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0002-8658-2819TikhonovaV. V.ТихоноваВ. В.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0002-5465-6094SolopovaO. N.СолоповаО. Н.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

MisyurinaE. N.МисюринаЕ. Н.
Russian Federation

3 Pekhotnaya St., Moscow 123182

123182 Москва, Пехотная ул., 3

https://orcid.org/0000-0002-4735-977XKasatkinaN. N.КасаткинаН. Н.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0003-3834-5816LyzhkoN. A.ЛыжкоН. А.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

https://orcid.org/0000-0002-0762-5631MisyurinV. A.МисюринВ. А.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

TurbaA. A.ТурбаА. А.
Russian Federation

104 Profsoyuznaya St., 117485 Moscow

117485 Москва, ул. Профсоюзная, 104

https://orcid.org/0000-0001-8399-057XSolodovnikA. A.СолодовникА. А.
Russian Federation

24 Kashirskoe Shosse, Moscow 115478

115478 Москва, Каширское шоссе, 24

SoldatovaI. N.СолдатоваИ. Н.
Russian Federation

104 Profsoyuznaya St., 117485 Moscow

117485 Москва, ул. Профсоюзная, 104

https://orcid.org/0000-0003-1349-2879MisyurinA. V.МисюринА. В.
Russian Federation

104 Profsoyuznaya St., 117485 Moscow

117485 Москва, ул. Профсоюзная, 104

N.N. Blokhin National Medical Research Centre of Oncology, Ministry of Health of RussiaФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава РоссииCity Clinical Hospital No 52 of the Moscow Healthcare DepartmentГБУЗ г. Москвы «Городская клиническая больница № 52 Департамента здравоохранения г. Москвы»GeneTechnologyООО «ГеноТехнология»150520196248542707201927072019Copyright ©; 2019, Kesaeva L.A., Bulanov A.Y., Finashutina Y.P., Tikhonova V.V., Solopova O.N., Misyurina E.N., Kasatkina N.N., Lyzhko N.A., Misyurin V.A., Turba A.A., Solodovnik A.A., Soldatova I.N., Misyurin A.V.Copyright ©; 2019, Кесаева Л.А., Буланов А.Ю., Финашутина Ю.П., Тихонова В.В., Солопова О.Н., Мисюрина Е.Н., Касаткина Н.Н., Лыжко Н.А., Мисюрин В.А., Турба А.А., Солодовник А.А., Солдатова И.Н., Мисюрин А.В.2019Kesaeva L.A., Bulanov A.Y., Finashutina Y.P., Tikhonova V.V., Solopova O.N., Misyurina E.N., Kasatkina N.N., Lyzhko N.A., Misyurin V.A., Turba A.A., Solodovnik A.A., Soldatova I.N., Misyurin A.V.Кесаева Л.А., Буланов А.Ю., Финашутина Ю.П., Тихонова В.В., Солопова О.Н., Мисюрина Е.Н., Касаткина Н.Н., Лыжко Н.А., Мисюрин В.А., Турба А.А., Солодовник А.А., Солдатова И.Н., Мисюрин А.В.https://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://umo.abvpress.ru/jour/article/view/218

Molecular genetic detection of CALR gene somatic mutations is required for myeloproliferative neoplasms diagnosis and treatment according to the novel WHO clinical recommendations. CALR mutations are found in approximately 25–35 % cases of essential thrombocythemia and primary myelofibrosis and they are associated with benign clinical outcome. In this study we have compared sensitivity and selectivity of seve ral different options of CALR mutation molecular genetic detection in blood samples of 379 CMD patients and 17 healthy donors. Among methods compared in our study there have been conventional polymerase chain reaction with electrophoretic detection, real-time quantitative polymerase chain reaction, direct Sanger sequencing of polymerase chain reaction fragments and polymerase chain reaction high resolution melting curve analysis. By means of melting curve analysis CALR mutations have been found in 97 (25.5 %) patients, whereas in the cases of Sanger sequencing and polymerase chain reaction there have been 87 (23.0 %) and 84 (22.1 %) CALR mutation positive patients respectively.

Молекулярно-генетические исследования для определения соматических мутаций в гене кальретикулина (CALR) включены в клинические рекомендации Всемирной организации здравоохранения в качестве одних из основных диагностических критериев миелопролиферативных заболеваний. Примерно в 25–35 % случаев эссенциальной тромбоцитемии и первичного миелофиброза бывают выявлены мутации в гене CALR, наличие которых ассоциировано с благоприятным прогнозом течения заболевания. В нашем исследовании выполнено сравнение результатов молекулярно-генетических методов для определения мутаций в гене CALR. Проведен анализ образцов периферической крови 379 пациентов с хроническими миелопролиферативными заболеваниями и 17 образцов крови здоровых доноров. Наличие мутаций в гене CALR определяли методом полимеразной цепной реакции с электрофоретической детекцией и количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени, методом секвенирования по Сэнгеру и анализом кривых плавления. Мутации в гене CALR определены у 97 (25,5 %) пациентов методом анализа кривых плавления. Из них у 87 (23,0 %) пациентов мутации в гене найдены методом секвенирования по Сэнгеру. С помощью полимеразной цепной реакции мутации в гене CALR были обнаружены у 84 (22,1 %) пациентов.

CALRpolycythemia veraessential thrombocythemiaprimary myelofibrosisCALRистинная полицитемияэссенциальная тромбоцитемияпервичный миелофиброзMisyurin A.V. Molecular pathogenesis of the myeloproliferative diseases. Klinicheskaya onkogematologiya. Fundamental’nye issledovaniya i klinicheskaya praktika = Clinical Oncohematology. Basic Research and Clinical Practice 2009;2(3):211–21. (In Russ.).Мисюрин А.В. Молекулярный патогенез миелопролиферативных заболеваний. Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика 2009;2(3):211–21.Chi J., Pierides Ch., Mitsidou A. et al. A sensitive detection method for MPLW515L or MPLW515K mutation in myeloproliferative disorders. Euro J Exp Bio 2014;4(5):33–6.Chi J., Pierides Ch., Mitsidou A. et al. A sensitive detection method for MPLW515L or MPLW515K mutation in myeloproliferative disorders. Euro J Exp Bio 2014;4(5):33–6.Tutaeva V., Misurin A.V., Michiels J.J. et al. Application of PRV-1 mRNA expression level and JAK2V617F mutation for the differentiating between polycytemia vera and secondary erythrocytosis and assessment of treatment by interferon or hydroxyurea. Hematology 2007;12(6):473–9. DOI: 10.1080/10245330701384005.Klampfl T., Gisslinger H., Harutyunyan A.S. Somatic mutations of ca lreticulin in myeloproliferative neoplasms. N Engl J Med 2013;369(25):2379–89. DOI: 10.1056/NEJMoa1311347.Klampfl T., Gisslinger H., Harutyunyan A.S. Somatic mutations of ca lreticulin in myeloproliferative neoplasms. N Engl J Med 2013;369(25):2379–89. DOI: 10.1056/NEJMoa1311347.Nangalia J., Massie C.E., Baxter E.J. et al. Somatic CALR mutations in myeloproliferative neoplasms with nonmutated JAK2. N Engl J Med 2013;369(25):2391–405. DOI: 10.1056/NEJMoa1312542.Michalak M., Corbett E.F., Mesaeli N. et al. Calreticulin: one protein, one gene, many functions. Biochem J 1999;2:281–92.Michalak M., Corbett E.F., Mesaeli N. et al. Calreticulin: one protein, one gene, many functions. Biochem J 1999;2:281–92.Zapun A., Darby N.J., Tessier D.C. Enhanced catalysis of ribonuclease B folding by the interaction of calnexin or calreticulin with ERp57. J Biol Chem 1998;273(11):6009–12. DOI: 10.1074/jbc.273.11.6009.Ning L., Qui-Mei Y., Gale R.P. et al. Frequency and allele burden of CALR mutations in Chinese with essential thrombocythemia and primary myelofibrosis without JAK2(V617F) or MPL mutations. Leuk Rec 2015;39(5):510–4.Jones A.V., Ward D., Lyon M. et al. Evaluation of methods to detect CALR mutations in myeloproliferative neoplasms. Leuk Res 2015;39(1):82–7. DOI: 10.1016/j.leukres.2014.11.019. Available at: https://www.lrjournal.com/ article/S0145-2126(14)00371-3/abstract.Luo W., Zhongxin Yu.Z. Calreticulin (CALR) mutation in myeloproliferative neoplasms (MPNs). Stem Cell Investig 2015;2:16. DOI: 10.3978/j.issn.23069759.2015.08.01. Available at: http://sci. amegroups.com/article/view/7264/8051.Reed G.H., Kent J.O., Witter C.T. Highresolution DNA melting analysis for simple and efficient molecular diagnostics. Pharmacogenomics 2007;8(6):597–608. DOI: 10.2217/14622416.8.6.597